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As leishmanioses estão entre as doenças mais negligenciadas do mundo. Estima-se que a cada ano ocorram 1,3 milhões de novos casos e mais de 20 000 mortes. Pertencem a um grupo de doenças causadas por mais de 18 espécies de protozoários do gênero Leishmania. O diagnóstico por métodos moleculares como PCR tem se mostrado bastante promissor. O PCR em tempo real tem sido muito utilizado. No entanto, poucos são os laboratórios que realizam esta metodologia, o que exige que as amostras coletadas em regiões distantes sejam transportadas para grandes centros, dificultando o procedimento. Uma forma de facilitar esse processo seria coletar as amostras de sangue diretamente em cartão filtro, que por serem impregnados com componentes químicos podem reter a amostra facilitando o transporte. Além disso, possibilita a recuperação do DNA para a análise por PCR. O presente estudo tem como objetivo avaliar a eficácia do método de extração de DNA de plasma a partir de amostra fixada em cartão comercial para amplificação por PCR. A extração de DNA das amostras de plasma canino, foi realizado através do método comercial para purificação de ácidos nucleicos, Kit Nucleid Acid and Protein Purification (Macherey-Nagel). Das amostras de plasma canino positivas para leishmaniose fixadas em cartão FTA Classic, a extração de DNA foi realizada pelo kit WhatmanTMFTATMCards (Ge Healthcare Life Sciences). A amplificação por PCR em tempo real teve como alvo uma região de 120 pb do minicírculos do gênero Leishmania. Essas sequências de DNA estão presentes em cópias múltiplas em uma região conservada dos minicírculos de DNA do Cinetoplasto (kDNA). A amplificação por PCR em tempo real foi realizada em um termociclador StepOne Real Time PCR Systems (AB Applied Byosystems) e os produtos amplificados foram detectados por meio do marcador (fluoróforo) SYBR® Green. Até o momento foi realizada a padronização da reação de PCR em tempo real com 100 amostras de plasma de caninos com diagnóstico de leishmaniose positivo e negativo e com DNA extraídos com a técnica Kit Nucleid Acid and Protein Purification. O PCR confirmou 35 amostras das 50 consideradas positivas nos testes sorológicos. Sendo que das 50 negativas, 45 também foram negativas no PCR e 5 foram positivas. Por enquanto 6 amostras com resultados positivos foram armazenadas no cartão FTA para a análise por PCR em tempo real. Destas 6 amostras foram feitas as amplificações, por meio do termocilador StepOne Real Time, que por sua vez gerou uma curva de dissociação (Melting curve), onde se mostrou resultados inespecíficos, quando comparados ao controle positivo, necessitando de adequações na padronização do método. O presente estudo busca contribuir para a melhora do diagnóstico de leishmaniose em cães buscando formas que facilitem a coleta de sangue de animais e também facilite o transporte de DNA para laboratórios especializados em técnicas moleculares.

Leishmania; cartão filtro; Extração.