A carne bovina deve atender ao consumidor quanto aos seus atributos de qualidade sensorial, entre os quais a maciez. Esta característica específica depende da proteólise enzimática natural das fibras musculares realizada pelas isoenzimas µ-calpaína (CAPN1) e m-calpaína (CAPN2), que são inibidas pela calpastatina (CAST). Estudos genéticos demonstraram a ocorrência de alelos destes genes, devido a polimorfismos de nucleotídeos únicos (SNPs, Single Nucleotide Polymorphisms), associados à maciez da carne bovina e têm sido utilizados em testes comerciais (como GeneSTAR, Igenity) para avaliação genética bovina. Os objetivos deste estudo foram: (1) implementar análises de dois SNPs da CAPN1 (CAPN1-316 e CAPN1-4751) e um SNP da CAST (CASTc:2832) associados com maciez de carne e (2) analisar as frequências alélicas e genotípicas destes polimorfismos em animais da raça Simental do Rio Grande do Sul. Amostras de pelo de 34 diferentes bovinos da raça Simental foram coletadas e submetidas à extração de DNA pelo método de adsorção em sílica com o uso do kit NewGene (Simbios Biotecnologia, Cachoeirinha, RS. Brasil). A amplificação das regiões dos SNPs foi realizada pela técnica da reação em cadeia da polimerase (PCR, Polymerase Chain Reaction) com o uso de primers específicos e as seguintes condições: (a) um ciclo a 95° C por 3 min e 35 ciclos a 35° C por 15 s, 60° C por 40 s e 70° C por 1 min para os SNPs CAPN1-316 e CASTc:2832; (b) um ciclo a 95° C por 3 min e 35 ciclos a 35° C por 15 s, 65° C por 40 s e 70° C por 1 min para o SNP CAPN1-4571. Após foi realizada a digestão com as enzimas de restrição Dde I (CAPN1-4751 e CASTc:2832) e BsaJ I (CAPN1-316). Os alelos foram analisados por contagem direta em gel de poliacrilamida corado com Nitrato de Prata após eletroforese. Os resultados demonstraram a implementação da genotipagem destes três SNPs possibilitando a avaliação dos animais da raça Simental. Até o momento foram analisados 34 animais para os SNPs CAPN1-4751 e CASTc:2832 e 15 animais para o SNP CAPN1-316. As frequências alélicas observadas foram: 0,54 T e 0,46 C (CAPN1-4751), 1,00 G e 0,00 C (CAPN1-316), 0,93 A e 0,07 G (CASTc:2832). Na análise dos genótipos, 11 animais apresentaram CC (32%), 9 CT (26%) e 14 TT (42%) para CAPN1-4751; todos 15 animais apresentaram o genótipo GG (100%) para CAPN1-316; 29 animais apresentaram AA (85%) e 5 AG (15%) para CASTc:2832. O alelo C do CAPN1-4751, favorável para a maciez, foi encontrado nos animais avaliados, mas em frequência inferior ao alelo desfavorável T. O alelo favorável C do CAPN1-316 não foi encontrado nos animais avaliados. Já o alelo favorável A do CASTc:2832 foi encontrado amplamente difundido. O presente estudo demonstra a implementação de testes para três polimorfismos associados à maciez de carne. Estas informações serão bastante úteis em programas de melhoramento animal visando cruzamentos dirigidos para aumento da maciez da carne.