Portal de Eventos da ULBRA., XX SALÃO DE INICIAÇÃO CIENTÍFICA E TECNOLÓGICA

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ANÁLISE PROTEÔMICA DO PLASMA SEMINAL DE CACHAÇOS DESCARTADOS EM CENTRAL DE INSEMINAÇÃO
Elistone Rafael Sontag, Franciele Lucca, Ivan Cunha Bustamante Filho

Última alteração: 17-10-2014

Resumo


O descarte de reprodutores em uma central e produção de doses de sêmen de suínos é um procedimento rotineiro e ocorre pela redução do número de doses produzidas. A razão desta redução ainda é desconhecida, mesmo com uma boa nutrição, habitação e gestão, e com isso aumenta o número de descartes e aquisição de novos suínos para o rebanho. O estudo da composição do plasma seminal trouxe uma nova compreensão da sua contribuição a qualidade do sêmen e capacidade de fertilização, mostrando complexas relações entre as proteínas, epidídimo, espermatozoides, trato feminino e oócitos. A proteômica descrita recentemente em javalis (Gonzalez-Cadavid et al, 2014) mostrou que 45,2% (+/- 8%) da intensidade total de spots pertencia a família das espermadesinas, na qual possuem cinco genes estreitamente relacionados; AQN-1, AQN-3, AWN, PSP-I, PSP-II e suas isoformas glicosiladas. Estas diferenças de glicosilação que são responsáveis pela ampla distribuição das mesmas no gel de 2D. O objetivo deste trabalho é descrever o perfil de proteínas do plasma seminal de cachaços descartados em uma central através da técnica de 2D SDS-PAGE. Foi utilizada uma dose de sêmen de 4 cachaços descartados. Na qual o descarte foi baseado na história dos últimos 10 ejaculados, onde os animais descartados tinham média de 22,5 meses, apresentando 59,8 (± 22,8) de motilidade total, 2,7 (± 0,9) de vigor com a média de doses de 7,75, com a média máxima de 15,5 e mínima 0. O plasma seminal foi separado dos espermatozoides através de duas centrifugações sendo a primeira a 800g por 10 min, e a segunda 12000 g por 1h a 4°C, sendo ainda adicionado inibidor de protease ao sobrenadante. Em seguida foi armazenado em -80ºC até o momento da análise. Uma alíquota de plasma seminal foi separada para quantificação de proteínas, na qual foi diluída para que fosse utilizado apenas 400ug por amostra. As amostras foram analisadas por 2D SDS-PAGE, utilizando tiras de 7cm com pH de 3-10 para isoeletrofocalização. A separação por peso molecular foi feita em gel de acrilamida de 15%.  Os géis foram corados com solução coloidal de Coomassie Blue R-250, e após fixação, foram digitalizados para análise de bioinformática. O perfil proteico era composto de 19,3 (+/-4,6) spots de proteínas com ponto máximo de 27 e mínimo de 16, estando as mais abundantes na região de 10-15kDa e 3-5 pI. Encontra-se em andamento a quantificação dos spots para comparação entre as amostras analisadas. A família das espermadesinas, é uma das famílias mais importantes encontradas no sêmen suíno, entender seu papel na fisiologia do esperma pode dar uma luz com relação a fertilidade suína e criopreservação.

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