A tuberculose (TB), apesar de potencialmente curável, nunca deixou de ser um grave problema para a saúde pública, visto que, no Brasil, estima-se que mais de 50 milhões de pessoas estejam infectadas pelo Mycobacterium tuberculosis, com aproximadamente cerca de 70 mil novos casos por ano. Atualmente, as ferramentas para detecção da resistência aos fármacos disponíveis na rede básica de saúde são laboriosas e demoradas, sendo comum ter que aguardar até mais de quatro semanas para obtenção do resultado. O desenvolvimento de novas técnicas para detecção da resistência aos fármacos possibilitaria um melhor direcionamento e por consequência, uma melhor resposta ao tratamento. Por esta razão, este trabalho teve o objetivo de avaliar a acurácia da técnica de hibridização em membranas para detecção de resistência aos fármacos rifampicina (RMP) e isoniazida (INH) através de mutações nos genes katG, rpoB e inhA relacionados com a resistência de Mycobacterium tuberculosis. As sondas foram fixadas em membrana de náilon para hibridizar com o produto de um PCR multiplex realizado com primers específicos. A hibridização foi detectada através de um sistema enzimático que formava um precipitado de cor púrpura. Os DNAs testados foram extraídos diretamente do escarro de pacientes diagnosticados com TB no município de Canoas - RS e os resultados comparados a microbiologia. Para a avaliação da acurácia deste novo método de detecção de resistência, será realizada a correlação dos resultados obtidos com o teste microbiológico de sensibilidade. Até o momento, a análise dos DNAs por essa metodologia identificou corretamente o perfil de susceptibilidade das cepas.  Os resultados ainda preliminares, mas promissores, indicam a possibilidade de utilizar esta metodologia como uma alternativa para a identificação rápida de resistência aos antimicrobianos utilizado no tratamento da TB.