A enorme complexidade do sistema de canais radiculares dos primeiros molares superiores pode explicar os elevados índices de falhas nos tratamentos endodônticos deste grupo de dentes, devido a não localização do quarto canal, o qual atende-se por canal mesiopalatino. Considerando a importância da detecção deste canal, tem-se valido, além de métodos clínicos visuais, da utilização de radiografias e métodos de magnificação como lupa e microscópio clínico operatório. Este estudo, in vitro, se propõe a avaliar a prevalência do canal mesiopalatino em raízes mesiovestibulares de primeiros molares superiores mediante quatro métodos: análise clínica visual, microscópio clínico operatório, lupa e radiogragias periapicais. Foram selecionados 74 primeiros molares superiores permanentes. A abertura coronária foi previamente executada com remoção completa do teto da câmara pulpar para melhor visualização dos orifícios dos canais. Em prosseguimento, a análise clínica visual do número de canais existentes foi realizada com o auxílio de uma sonda exploradora endodôntica reta e uma lima manual tipo K tamanho 10. Após, os elementos dentários em que não foram localizados o quarto canal passaram para a análise com o auxílio de uma lupa com magnificação de 2,5/300vezes, microscópio clínico operatório com aumento de 20 vezes e radiografias periapicais na incidência disto-excêntrica com 20 graus de angulação, distância focal de 4 centímetros e tempo de exposição de 0,50 segundos, respectivamente. Os resultados obtidos da localização do canal mesiopalatino através dos quatro métodos adotados foram analisados através de testes estatísticos pela regra de três simples. O canal mesiopalatino foi encontrado em 55,40% dos dentes através da análise clínica visual, em 70,27% com a análise com lupa, 85,13% com o microscópio clínico operatório, 90,54% com radiografias periapicais e em 7 dentes não foram localizados o quarto canal em nenhuma das quatro etapas.  A localização do canal mesiopalatino foi significativamente maior na análise com microscópio operatório e com tomadas radiográficas do que na análise clínica visual; a análise com lupas foi relativamente ineficaz em comparação com o microscópico operatório; apenas 9,46% dos canais não foram localizados; as radiografias são essenciais para a detecção do canal mesiopalatino, quando da deposição de dentina secundária sobre o orifício dos canais.