Última alteração: 17-10-2014
Resumo
O epidídimo, órgão essencial para a fertilidade do macho, é o local de maturação espermática pós-testicular. Este processo é mediado por secreções proteicas na luz dos túbulos epididimários oriundas das células que constituem seu epitélio. O resultado deste processo é a transformação de uma célula quase inerte em um gameta com motilidade e alta capacidade fecundante. As proteínas necessárias para a maturação espermática devem sofrer modulação na sua estrutura conformacional. Dessa forma, o sistema de qualidade de síntese proteica, mediado por chaperonas, deve ser atuante, garantindo que todas as proteínas exerçam suas funções. Dentre as chaperonas existentes, o presente trabalho aborda as proteínas da família dissulfeto isomerase (PDI), especificamente a PDILT. Estudos demonstram que esta chaperona é exclusivamente expressa no testículo, sendo detectada em espermatozoides de suínos nas regiões da cabeça e corpo do epidídimo. O objetivo deste trabalho foi analisar a expressão gênica da PDILT no tecido epididimário de suínos castrados cirurgicamente e imunocastrados com vacina comercial Vivax, Pfizer. Foram utilizados testículos e epidídimos de quatro animais púberes, sendo dissecados os epidídimos, separando-se as regiões da cabeça, corpo e cauda. Cerca de 100mg de cada tecido foi lavado em PBS gelado, e, após maceração, procedeu-se o protocolo de extração de RNA total com kit comercial. Para a síntese de cDNA (RT-PCR) foi utilizado 1,5mg de RNA total, 200 U de M-MLV, 10 mM dNTP, 10 mM random primers. Para a PCR, foram utilizados primers degenerados baseados nas sequências descritas de mRNA de PDILT de camundongo, rato, humano e de bovino, uma vez que a sequência para a espécie suína ainda não ter sido descrita. Como controle de expressão utilizou-se o gene da β-actina. A expressão de mRNA de PDILT também foi encontrada no testículo (4/4). Bandas com peso molecular esperado (200pb) também foram encontradas nas regiões de cabeça (2/3), corpo (2/3) e cauda (2/3) do epidídimo. As bandas amplificadas foram excisadas do gel de agarose para serem sequenciadas. A confirmação da expressão da PDILT no epidídimo permite elaborar a hipótese de que o conteúdo de espermatozoides na secreção epitelial é obtido a partir do lúmen dos túbulos epididimários. Estudos vêm sendo realizados para confirmar o papel fisiológico da PDILT em espermatozoides suínos.
Palavras-chave: chaperona, PDILT, epidídimo, expressão gênica