Portal de Eventos da ULBRA., XIX SALÃO DE INICIAÇÃO CIENTÍFICA E TECNOLÓGICA

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Desenvolvimento de teste de detecção molecular de genótipos vacinais e de campo do vírus da bronquite infecciosa (VBI) das galinhas
Fernanda Jesus Braga, Isadora Lewandowski, Aline Padilha Fraga, Nilo Ikuta, Marcos Vinícios Schiavoni Correa, Vagner Ricardo Lunge

Última alteração: 25-10-2013

Resumo


A produção industrial de aves é um processo intensivo e muitas doenças infecciosas afetam os lotes nas granjas comerciais. A bronquite infecciosa das galinhas (BIG) é uma destas doenças, afetando aves de todas as idades e causando importantes perdas econômicas. A BIG é causada pelo vírus da bronquite infecciosa (VBI) que pertence à família Coronaviridae e tem como característica marcante as espículas (spike, S) no envelope. O material genético é RNA fita simples, sentido positivo, com aproximadamente 27.600 nucleotídeos. O VBI apresenta grande diversidade genética, sendo classificado em sorotipos e genótipos vacinais (como a cepa Massachusetts - Mass) ou variantes. Estudos recentes demonstram que existe uma grande disseminação de genótipos variantes de campo no Brasil (denominados BR e classificados em BR-I e BR-II). A confirmação de infecção pelo VBI é realizada por testes laboratoriais como isolamento e detecção do RNA viral. Técnicas moleculares modernas, como a transcrição reversa seguida da reação em cadeia da polimerase em tempo real (RT-qPCR), possibilitam um diagnóstico sensível, rápido e menos laborioso. O objetivo desta pesquisa foi desenvolver técnicas laboratoriais de RT-qPCR para a detecção específica da cepa Mass e genótipos BR. Foram obtidas 21 amostras de vírus isolados (3 vacinas comerciais e 4 isolados de liquido alantóide do genótipo Mass, e 14 isolados de liquido alantóide dos genótipos BR-I e BR-II) e várias amostras clínicas de aves (matrizes, poedeiras e frangos de corte) em pools de órgãos. Em paralelo, foram desenhados conjuntos de primers e sondas específicos para os genótipos Mass e BR, tendo como alvo o gene S (porção S1). As amostras foram submetidas à extração do RNA viral e analisadas com o teste de detecção padrão de VBI (RT-qPCR da região 5´UTR do genoma) e com os dois métodos genótipos específicos (Mass RT-qPCR e BR RT-qPCR). As amplificações foram consideradas positivas nas amostras com leitura até o ciclo (Ct) 35. Os amplicons foram submetidos à eletroforese em gel de poliacrilamida para observação dos fragmentos de tamanho esperado: 143 pares de bases (bp) para o 5´UTR RT-qPCR, 120bp para o Mass RT-qPCR e 219 bp para o BR RT-qPCR. Os resultados obtidos demonstraram a detecção de todas as amostras de genótipo Mass (3 vacinas e 4 isolados) e a não amplificação de nenhuma amostra dos genótipos BR utilizando o método Mass RT-qPCR, inclusive com uma elevada correlação de valores de Ct com o teste padrão. No entanto, apenas as amostras de genótipos BR-I apresentaram resultados positivos com o método BR RT-qPCR (Mass e BR-II apresentaram resultados negativos) e não houve uma boa correlação com os valores de Ct do teste padrão. Estes resultados preliminares demonstram o desenvolvimento de um método para a detecção de amostras do genótipo Mass, mas ainda não dos genótipos BR. Novos estudos estão sendo desenvolvidos para a implementação do método específico para detecção de amostras do genótipo BR.

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