A tuberculose (TB) pulmonar, causada por Mycobacterium tuberculosis, é considerada uma das mais graves doenças infecciosas, sendo uma das primeiras causas de morte entre os pacientes com HIV/AIDS. Estima-se que pelo menos um terço da população mundial esteja infectada e dados recentes têm apontado que a multirresistência aos principais fármacos do tratamento já é considerada comum. O diagnóstico de referência é o microbiológico (baciloscopia e/ou cultura). No entanto, na grande maioria dos locais, apenas a baciloscopia que carece de sensibilidade (em torno de 50%) é utilizada, fazendo com que sintomas clínicos e exames complementares sejam necessários para a determinação de cada caso. O objetivo deste estudo foi avaliar a utilização de uma metodologia molecular (DETECT-TB) na identificação de DNA de M. tuberculosis diretamente de amostras clínicas de escarro coletadas de pacientes atendidos no setor de tisiologia do município de Canoas (Rio Grande do Sul). Os resultados foram comparados com a cultura. O método foi preparado com todos os reagentes necessários para realizar desde a etapa de extração até a detecção do DNA seguindo normas de fabricação de produto piloto. A detecção de DNA foi realizada por amplificação e a hibridização foi feita por reação colorimétrica em placas de ELISA previamente sensibilizadas com sondas específicas do elemento de inserção IS 6110 do genoma. Foram analisadas 216 amostras. Do total, 39 amostras foram positivas em cultura, e 57 mostraram-se positivas no DETECT-TB. Das 177 negativas, 159 negativaram ao uso do kit. Dessa forma, os resultados de sensibilidade e especificidade foram de, respectivamente, 72 e 84%. Portanto, torna-se cada vez mais necessário que a busca por novas formas mais rápidas e eficazes de diagnóstico da TB sejam desenvolvidas por outras formas de tecnologias, tendo em vista os problemas graves que enfrenta a saúde pública no Brasil.