A ameaça à saúde dos trabalhadores está presente no cultivo do tabaco e inclui a manipulação das folhas de fumo molhadas, pois além das substâncias tóxicas persistentes como alguns agrotóxicos, outros compostos orgânicos com potencial genotóxico estão presentes nas folhas do tabaco, que úmidas contêm aproximadamente 6-8 % de nicotina. O principal composto relacionado à absorção transdermal na colheita de fumo é a nicotina, que é facilmente absorvida pela pele dos agricultores; a nicotina penetra na camada córnea e atinge os vasos sanguíneos, difundindo-se pelo organismo. Esse fator de risco ocupacional à saúde de trabalhadores do campo no plantio de tabaco é conhecido como Síndrome da Folha Verde ou Green Tobacco Sickness (GTS). As propriedades físico-químicas da nicotina facilitam sua absorção. Cerca de 70% da nicotina circulante é metabolizada em cotinina pelo CYP 450 e pelo aldeído oxidase. A cotinina tem uma meia vida média de 20 horas e aparentemente não tem ação farmacológica direta; é metabolizada em trans-3’-hidroxicotinina pelo fígado e 70% da cotinina é excretada pelos rins sob a forma deste metabólito. Neste trabalho pretende-se quantificar o conteúdo de nicotina e cotinina em plasma de agricultores que trabalham na fumicultura, empregando-se a padronização cromatográfica em CLAE. A metodologia consistirá na coleta de sangue de indivíduos que trabalham na fumicultura. Um grupo controle (pareado) será formado por pessoas que trabalham em outras atividades, não exposto ao manuseio das folhas de fumo. Após a coleta, as amostras serão levadas ao laboratório e centrifugadas. Os soros serão mantidos congelados até a realização das análises. A proposição da metodologia analítica foi feita através do estudo das publicações referentes à análise de nicotina e cotinina por CLAE, considerando-se a finalidade da análise e a disponibilidade de reagentes e equipamentos no laboratório. As condições cromatográficas serão estabelecidas a partir da injeção de soluções metanólicas dos padrões de nicotina, cotinina e 2-fenilmidazol (PI). Serão testadas diferentes composições de fases móveis, comprimentos de onda e de vazões da fase móvel. A análise qualitativa será realizada pela determinação do tempo de retenção relativo ao PI. A curva analítica será determinada através da adição de padrões de nicotina e cotinina e padrão interno em amostras de plasma humano de voluntários não tabagistas em concentrações pré-estabelecidas, submetidas à técnica de extração. A extração do analíto será feita a partir de plasma ao qual serão adicionados PI, NaOH 1 mmol/L e CH₂Cl₂. Após etapas de preparo da amostra o resíduo será retornado em 100 mL de fase móvel e programada a injeção para 20 mL. Os resultados deste trabalho deverão contribuir, juntamente com um conjunto de análises, para a identificação dos danos causados pela exposição de agricultores que trabalham na fumicultura.