No presente projeto são desenvolvidas metodologias analíticas para a identificação e/ou quantificação de compostos bioativos, utilizando a cromatografia líquida de alta eficiência (CLAE). A CLAE é um método físico-químico de separação, em que os constituintes de determinada amostra interagem com um solvente (fase móvel), o qual é eluído por uma bomba de alta pressão através de uma coluna cromatográfica (fase estacionária). Este tipo de cromatografia é capaz de separar e analisar constituintes químicos em escala de minutos com alta resolução, eficiência e sensibilidade; sendo um método bastante utilizado para a determinação de aminoácidos em amostras biológicas. O objetivo deste estudo é otimizar analiticamente a quantificação de glutamato em líquor cefalorraquidiano de ratos submetidos ao modelo de nocicepção. O glutamato é um dos aminoácidos mais presente no SNC, possui importante função no desenvolvimento neuronal, aprendizado, memória, envelhecimento, epilepsia, ansiedade, depressão e dor neuropática. O glutamato atua na membrana plasmática dos interneurônios excitatórios do corno dorsal, sendo assim, um dos principais neurotransmissores da dor. Utilizou-se a metodologia de análise de CLAE, no equipamento Perkin Elmer, modelo: séries 200; pelo método de eluição por gradiente com coluna de fase reversa C18 5mm (250 x 4,6 mm), com fluxo de eluição de 1mL.min^-1 e detector UV ajustado com l = 254nm e com sensibilidade de 0,01 AUFS. O método é empregado com sistema binário das fases A (Acetato de Sódio 0,09 M) e B (Acetonitrila-Água 6:4 v/v); com diferentes gradientes em estudo. O método analítico será validado no que diz respeito à sensibilidade, curva analítica e linearidade, limite de detecção e de quantificação. O aminoácido presente na amostra biológica é derivatizado (acoplamento com um cromóforo) permitindo sua identificação. Após esse processo, o material é aplicado no sistema de cromatografia e o resultado é comparado com um padrão de concentração conhecida. A derivatização tem sido realizada através da reação com fenilisotiocianato. Desta forma, tem-se a formação do feniltiocarbamil, composto derivatizado a partir da reação do fenilisotiocianato ao glutamato.  Desta forma a CLAE oferece seletividade, enquanto a derivatização oferece a detectabilidade, sensibilidade e um menor tempo de análise para este aminoácido.