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Os Glioblastomas Multiformes (GBM) são tumores caracterizados pela invasão e destruição ao tecido cerebral e resistência a radioterapia e quimioterapia. O uso do Temozolodamida (TMZ) como complemento à radioterapia pós-operatória em pacientes com GBM mostra sinais de que a sobrevida dos pacientes aumenta devido a sua eficácia e baixa toxicidade ao indivíduo. O Objetivo desse trabalho é investigar o potencial genotóxico e citotóxico do TMZ em linhagem celular de glioblastoma multiforme humano U87MG. A linhagem U87MG foi mantida em meio de cultura DMEM suplementado com 15% de soro fetal bovino em condições padrão de cultivo. Inicialmente, a linhagem celular U87MG foi tratada com doses seriadas de TMZ por 72 h. 24 h antes dos tratamentos com os fármacos, as células foram incubadas em microplacas de 96 poços, em uma densidade de 4 x 10⁴ células/100 µL/poço. A citotoxicidade foi avaliada utilizando o ensaio colorimétrico de Sulforodamida B (SRB). A partir deste ensaio determinamos os valores de IC₅₀ (quantidade de fármaco necessária para inibir 50% do crescimento celular). Estes foram realizados em triplicata. A detecção de danos ao DNA foi realizada pelo ensaio cometa. Neste teste foram adicionadas doses de IC₂₀ (89 µM), IC₅₀ (355 µM) e IC₇₀ (830 µM) de TMZ, por 24 h, além do controle não tratado. As células a serem analisadas foram homogeneizadas com gel de agarose de baixo ponto de fusão, distribuídas sobre lâminas de vidro previamente cobertas com gel de agarose de ponto de fusão normal. Após serem mergulhadas em solução de lise foram submetidas a eletroforese em condições alcalinas (pH>13). A seguir foram coradas com brometo de etídio para que os núcleos das células portadoras de quebras de DNA fossem visualizadas sob a forma de um cometa, em microscópio de fluorescência (Olympus BX51). Um total de 100 células foram analisadas por amostra. Os núcleos intactos aparecem redondos, enquanto que nas células lesadas, o DNA livre migra do núcleo em direção ao ânodo, mostrando uma cauda de fragmentos, semelhante a um cometa. Estes fragmentos podem se apresentar em diferentes tamanhos, e ainda estar associados ao núcleo por uma cauda simples. A classificação dos cometas foi realizada por meio de um software (Comet Assay IV - Perceptive) acoplado ao microscópio. O parâmetro utilizado para a avaliação de danos foi a % de DNA na cauda (tail intensity). O TMZ é um agente que induz alquilação na posição O⁶ da guanina, ocorrendo também alquilação adicional na posição N⁷, levando a célula à morte por dano ao DNA. Na avaliação da citotoxicidade se determinou o IC₅₀ (355 µM). Pôde ser observado no ensaio cometa um aumento considerável de dano genotóxico com o aumento da dose, sendo o efeito mais significativo em doses acima de 355 µM_. Contudo não se vê uma diferença significativa nos danos obtidos nas células expostas tanto a 355 µM quanto a 830 µM.

Temozolodamida, Glioblastoma Multiforme, U87-MG.